L’impact différentiel du virus respiratoire syncytial et du virus parainfluenza sur la fréquence de l’otite moyenne aiguë est expliqué par des réponses immunitaires inaptes et inaptes chez les enfants sujets à l’otite

Contexte L’otite moyenne aiguë est une cause majeure d’infections bactériennes pédiatriques associées à des infections virales des voies respiratoires supérieures. Nous avons examiné l’impact différentiel des virus URS du virus respiratoire syncytial et du virus parainfluenza sur la fréquence de l’OMA causée par Streptococcus pneumoniae Spn et Haemophilus influenzae NTHi non typé. enfants séropositifs à base d’otite et sujets non sujets à l’otite comme un mécanisme potentiel pour expliquer la sensibilité accrue aux AOMMethods Le sang périphérique et les lavages nasaux ont été obtenus chez les enfants sOP et NOP n = Colonisation et réponses antivirales consistant en immunoglobulines G totales spécifiques IgG Les neutrophiles isolés ont été infectés avec des multiplicités d’infection variables des deux virus, et le potentiel d’opsonophagocytose a été mesuré. Résultats Une augmentation significative a été trouvée dans la fréquence des événements AOM causés par Spn et NTHi, avec un Ces résultats étaient corrélés avec une diminution des IgG spécifiques du VRS, des charges nasales virales plus élevées et une capacité de neutralisation des IgG plus faible. Les enfants sOP avaient des réponses lymphocytaires T diminuées au VRS qui étaient corrélées avec un récepteur / transcrit inférieur de type Toll et diminuaient l’expression de HLA-DR sur les cellules présentatrices d’antigène RSV interféré avec la capacité phagocytaire Spn des neutrophiles d’une manière dose-dépendante Les infections virales parainfluenza n’ont pas affecté différemment les événements AOM chez les enfants SOP et NOPConclusions Les réponses immunitaires innée et adaptative au RSV chez les enfants SOP peut ralentir la cinétique de la clairance virale du nasopharynx et permettre une interférence virale avec les réponses immunitaires antibactériennes, contribuant ainsi à augmenter la fréquence des AOM

réponses immunitaires adaptatives, otite moyenne aiguë, enfants à tendance otite, virus respiratoire syncytial, virus parainfluenzaOnite moyenne aiguë AOM représente environ% des visites chez les pédiatres et est fréquemment causée par Streptococcus pneumoniae Spn ou Haemophilus influenzae NTHi non typable La plupart des études antérieures ont Nous avons utilisé une tympanocentèse pour confirmer le diagnostic d’OMA et identifier clairement les populations authentiques d’enfants obésité. terme «otite à prédisposition stricte»; basé sur le diagnostic utilisant la tympanocentèse avec microbiologie diagnostique Un deuxième groupe que nous appelons NOP non otite parce qu’ils n’ont pas / AOMs peu fréquents Dans notre cohorte d’étude, SOPs comprennent% -% de tous les enfants Différences dans les enfants SOP et NOP dans le contrôle immunologique inné et adaptatif des infections bactériennes et virales pourrait influencer si la colonisation bactérienne du nasopharynx NP lors d’une infection virale supérieure des voies respiratoires URI se poursuit à AOM, sinusite ou pneumonie Des travaux antérieurs ont montré une association d’AOM avec le virus respiratoire syncytial simultané induite par le RSV URI RSV est également un agent pathogène important chez les personnes âgées , probablement en raison de l’immunosénescence; Notre étude peut avoir des implications pour les infections à VRS chez les personnes âgées. Nous avons déjà montré que les enfants atteints de SOP ont une réponse immunitaire adaptative médiocre à Spn et NTHi Les enfants génèrent des réponses d’anticorps au VRS; Les réponses immunitaires adaptatives aux infections virales respiratoires pourraient avoir un impact sur le contrôle de la réplication virale dans la muqueuse nasale ou pulmonaire. Il s’agit de la première étude à examiner la contribution des déficits immunitaires dans la conduite de l’infection bactérienne des voies respiratoires supérieures. Nous avons inclus le virus parainfluenza humain de type hPIV comme comparateur parce que les deux virus causent fréquemment des infections virales respiratoires, bien qu’à différentes saisons de l’année , il n’y a pas de vaccin pour l’un ou l’autre et partagent de nombreuses caractéristiques similaires modifications de réponse par des protéines virales

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Les patients

Les enfants ont été recrutés à l’âge de quelques mois dans une étude prospective et définie comme SOP ou NOP comme décrit précédemment. Les sécrétions de NP ont été obtenues à partir de NP Chaque fois qu’un enfant subissait un OMA, le sang, les sécrétions NP et le fluide tympanocentèse L’identification bactérienne a été accomplie comme indiqué précédemment Le comité d’examen des sujets de recherche de l’Hôpital général de Rochester a approuvé l’étude

Diagnostic viral respiratoire

Des espèces virales ont été identifiées dans des échantillons NP obtenus avec des brosses floquées. L’ARN viral a été isolé à l’aide de kits d’extraction d’ARN viral Qiagen, amplifiés par RTR-PCR en temps réel avec RTVa, RSVb, hPIV, grippe A, influenza B, adénovirus, des kits d’entérovirus et de rhinovirus spécifiques à chaque virus Primer Design, UK et concentration déterminés selon les instructions du fabricant

Expansions virales

RSVa A, RSVb B WV //, et hPIV C ont été obtenus à ATCC Manassas, Virginie et cultivées dans des cellules Hep RSV ou des cellules LLC-MK hPIV pendant des jours avant la récolte. Les surnageants ont été clarifiés par centrifugation à RPM pendant minutes et des aliquotes virales ont été congelé à – ° C

Essais d’anticorps

Les particules virales RSVa / b, ou hPIV, × / mL dans une solution saline tamponnée au phosphate, ont été inactivées à la chaleur ° C pendant quelques minutes et ajoutées aux plaques immuno-enzymatiques Immulon II ThermoFisher, Hampton, New Hampshire pendant la nuit à avec du lait écrémé Enfant et plasma de référence obtenu à partir d’adultes avec des concentrations connues en immunoglobulines G [IgG]

Neutralisations virales

RSVa ou hPIV multiplicité d’infection [MOI] ont été incubées avec chaleur de plasma dilué en série inactivé pendant heure à ° C dans Dulbecco modifié milieu Eagle sans sérum fœtal bovin FBS La neutralisation de RSV a été déterminée à l’aide d’un MTT Promega, Fitchburg, Wisconsin a été déterminée similaire à d’autres études

Titres d’inhibition de l’hémagglutination

Les titres HAI d’inhibition de l’hémagglutination ont été déterminés comme décrit précédemment

Dosages de cytokine nasale

Des prélèvements nasaux congelés ont été décongelés et la protéine totale a été étalonnée à mg / mL en utilisant un dosage de l’acide bicinchoninique Pierce Scientific, Rockford, Illinois ElisaMax BioLegend, San Diego, Californie, a analysé des aliquotes de 200 microlitres pour l’interféron IFN γ, interleukine IL , IL-, IL-α et IL-β

Essais de cellules T

Des cellules mononucléaires du sang périphérique ont été décongelées et reposées pendant une nuit à ° C. RSVa, RSVb ou hPIV a été ajouté à une MOI de Après des heures d’infection, bréfeldine A μg / mL et anti-CD μg / mL ont été cultivées pendant des heures. à récolter Des cellules supplémentaires ont été cultivées en présence de bréfeldine A avec ou sans témoins positifs et négatifs d’entérotoxine B staphylococcique, respectivement. Les cellules ont été colorées en surface en utilisant le colorant amine LIVE / DEAD Invitrogen, Carlsbad, Californie et des anticorps contre CD, CD et CD BioLegend suivi d’une coloration intracellulaire pour IFN-γ, IL-, IL-, IL-, IL-a, et le facteur de nécrose tumorale α BioLegend Data ont été acquis sur LSRII BD Biosciences avec un colorant amine vivant et une discrimination de doublet et analysés avec le logiciel FlowJo TreeStar , Ashland, Oregon

Analyse de cellules présentatrices d’antigènes

Les PBMC ont été décongelées et reposées pendant une nuit à ° C et infectées avec RSVa ou hPIV à une MOI de l’expression HLA a été comparée par cytométrie en flux avant l’infection et heures après l’infection sur les cellules dendritiques DC CD, CD, CD, CD négatif avec HLA-DR et blocage CDc positif avec des cellules dendritiques plasmacytoïdes / détermination des cellules dendritiques myéloïdes par des anticorps pour CD et B CD, CD, CD négatif, coloration positive IgM

qRT-PCR pour les récepteurs de type péage

Les PBMC ont été décongelées et reposées pendant une nuit à ° C suivie d’une déplétion magnétique CD et CD L’ARN cellulaire a été extrait en utilisant un kit d’extraction RNA Plus Qiagen, Gaithersburg, Maryland 100 nanogrammes d’ARN ont été transcrits en utilisant Superscript III Invitrogen qRT-PCR SYBR Green Bio-Rad, Hercules, Californie pour amplifier des cibles en utilisant GPDH comme calibrateur interne ou Toll-like récepteur TLR,,,, et amorces conçues en utilisant PrimerBank Harvard, Cambridge, Massachusetts Les données ont été calculées par la méthode ΔΔCT et exprimées en changement de pli entre les groupes Chaque échantillon a été amplifié deux fois et moyenné

Test de phagocytose

Les cellules neutrophiles ont été isolées du sang des enfants SOP ou NOP par centrifugation en gradient de densité après séparation Ficoll des PBMC Les cellules ont été infectées avec des doses croissantes de hPIV ou RSVa à une MOI de,,, et et incubées pendant une nuit à ° C. dans du RPMI% FBS sans antibiotiques Du plasma humain traité thermiquement contenant des anticorps capsulaires de type A et du complément de lapin Thermo Fisher à μg / mL ont été ajoutés à% vol / vol Spn sérotype A souche BG cultivé dans le bouillon Todd Hewitt Difco avec% extrait de levure Le mélange de bactéries, d’anticorps et de complément a été incubé pendant quelques minutes à ° C, puis ajouté aux neutrophiles à une concentration de bactéries par neutrophile. Après des heures d’incubation à ° C, les cellules ont été incubées à 0 ° C. ont été lavés, colorés avec CD, CDc et CD, et analysés par cytométrie en flux avec une double discrimination et colorant aminé vivant Les neutrophiles ont été identifiés sur la base de CDc, CD négatif avec CD bactérie positive ont été identifiés par fluorescence du colorant PKH dans le canal isothiocyanate de fluorescéine

Analyses statistiques

Les données ont été analysées à l’aide de tests t de Student terminés, les résultats des tests U de Mann-Whitney avec distribution non normalisée, ou les tests exacts de Fisher, et P & lt; était considéré comme significatif

RÉSULTATS

Les cohortes SOP et NOP étaient similaires en ce qui concerne le sexe, l’origine ethnique, la fréquence de l’allaitement maternel, la fréquentation des garderies et l’exposition des fumeurs à la maison et les antécédents familiaux d’otite moyenne, bien que les enfants SOP étaient plus fréquemment atopiques. mois de vie peuvent ne pas générer des réponses innées ou adaptatives à l’infection par le VRS similaires à celles & gt; Les personnes non infectées au cours d’une première saison d’exposition risquent d’être infectées au cours d’une deuxième saison en raison de la prévalence hivernale du VRS et de l’absence d’un vaccin homologué. Dans la présente étude, les enfants Pour évaluer le rôle de la première saison d’exposition en tant que facteur de confusion possible, nous avons examiné l’état immunitaire de référence dans le sang obtenu à l’âge de plusieurs mois et constaté que seul un enfant de chaque groupe pouvait avoir été infecté. VRS d’une saison antérieure Nous avons également comparé l’âge des enfants dans les groupes SOP et NOP et nous avons constaté qu’ils étaient bien appariés, avec un âge médian de mois pour les deux cohortes. Tableau Caractéristiques du patient Caractéristique sOP n = NOP n = P Valuea Sexe Masculin%% Femmes%% Ethnicité Blanc%% Afro-américain%% Asiatique%% Hispanique / Latino%% Autre / mixte%% Allaitement maternel & gt; mo%% & lt; mo%% Garderie Aucune%% Maison ou centre%% Fumeur à la maison Oui%% Non%% Antécédents familiaux de l’OM Non%% Oui%% Atopie Non%% Oui%% Caractéristique sOP n = NOP n = P Valuea Sexe Masculin %% Féminin%% Ethnicité Blanc%% Afro-Américain%% Asiatique%% Hispanique / Latino%% Autre / mixte%% Allaitement maternel & gt; mo%% & lt; mo%% Garderie Aucune%% Maison ou centre%% Fumeur à la maison Oui%% Non%% Antécédents familiaux d’OM Non%% Oui%% Atopy Non%% Oui%% Abréviations: NOP, non otite; OM, otite moyenne; sOP, otite définie rigoureusement définie P & lt; déterminé par des tests exacts de Fisher

Association de RSV et de PIV avec la colonisation bactérienne NP et AOM

La prolifération de NP par des otopathogènes bactériens pendant des mois ayant des taux plus élevés de virus respiratoires circulants pourrait entraîner davantage d’événements OMA quel que soit le type de virus infectant. Nous avons constaté que les PON étaient plus susceptibles que les enfants NOP d’être colonisés par Spn et NTHi tout au long de l’année. une saison particulière de l’année Tableau Nous avons précédemment observé qu’environ% d’AOM surviennent dans le contexte d’une URI virale concomitante, avec la fréquence la plus élevée d’OMA entre décembre et mai dans la population étudiée MEP, observation personnelle. La colonisation NP des otolithes bactériennes entre décembre et mai et juin et novembre quelques AOM chez les enfants SOP et NOP pour déterminer si la colonisation NP correspondait à des taux accrus d’OMA Nous n’avons trouvé aucune différence Table, suggérant qu’une autre causalité entraîne des taux d’OMA autres que la fréquence des taux de colonisation de la table de colonisation des patients de la cohorte pas de spn ou de NT non colonisé Salut Pas de valeur P colonisée Tous les mois, – sOP & lt; NOP Non Colonisé Hiver / Printemps Non Colonisé Été / Automne P Valeur Saisons virales, – SOP NOP Non Non-colonisé Non ou NTHi Non Valeur P colonisée Tous les mois, – sOP & lt; NOP Non Colonisé Hiver / Printemps Non Colonisé Été / Automne P Valeur Saisons virales, – SOP NOP P valeurs déterminées par le test exact de FisherAbbreviations: NOP, non otite; NTHi, Haemophilus influenzae non typable; SOP, otite à prédisposition stricte définie; Spn, Streptococcus pneumoniaeNous avons ensuite examiné si une corrélation existait entre la fréquence de colonisation Spn ou NTHi NP pendant les mois d’infection virale de pointe connus pour RSV Décembre-Février et hPIV Mars-Mai et le développement simultané de AOM Nous avons trouvé que Spn / NTHi La saison du VRS était plus souvent associée à l’AOM concomitante dans la POP que dans le cas des enfants NOP P =; Figure A et B En mars-mai, les enfants NOP ont montré une tendance à une colonisation plus fréquente des NP sans développement d’AOM par rapport aux enfants SOP P =; Figure A et B Nous avons examiné la fréquence de l’infection par RSV et hPIV chez les enfants SOP et NOP en ce qui concerne l’infection bactérienne otopathogène et trouvé une association significative entre AOMs causés par Spn et NTHi lors d’infections par RSV chez les enfants POP P & lt; ; Figure C Ces données indiquent que l’infection par le VRS cause une AOM plus fréquemment chez les enfants SOP que chez les enfants NOP, ce qui suggère que les enfants SOP peuvent ne pas répondre à l’infection par le VRS ainsi que les enfants NOP Association Figure 2: Association forte entre virus respiratoire syncytial VRS et otite moyenne aiguë OMA chez les enfants SOP à otites aiguës à définition stricte Fréquence de colonisation nasopharyngée ou AOM par otopathogènes bactériens à travers les saisons chez les enfants SOP A et NOP B non otitis-sensibles * P =, comparant la fréquence de l’OMA des enfants SOP vs NOP pour des mois similaires n = sOP, n = NOP, moyenne C, fréquence du VRS ou du virus parainfluenza humain de type hPIV chez les enfants SOP et NOP par rapport à l’AOM ou non POM ; comparant la fréquence de l’AOM entre RSV et hPIV pour les enfants SOP vs NOP n = sOP et n = NOP, moyenne * Les tests exacts de Fisher ont été utilisés pour l’analyse statistique Abréviations: AOM, otite moyenne aiguë; NOP, non-otite sujettes; NTHi, Haemophilus influenzae non typable; PIV, virus parainfluenza; VRS, virus respiratoire syncytial; SOP, otite à prédisposition stricte définie; Spn, Streptococcus pneumoniaeFigure View largeTélécharger une forte association entre le virus respiratoire syncytial RSV et l’otite moyenne aiguë AOM chez les enfants SOP à tendance otique rigoureusement définis Fréquence de la colonisation nasopharyngée ou AOM par les otopathogènes bactériens à travers les saisons chez les enfants SOP A et non-otites NOP B * P =, comparant la fréquence de l’OMA des enfants SOP vs NOP pour des mois similaires n = sOP, n = NOP, moyenne C, fréquence du VRS ou virus parainfluenza humain type hPIV chez les enfants SOP et NOP par rapport à AOM ou non AOM P & lt; comparant la fréquence de l’AOM entre RSV et hPIV pour les enfants SOP vs NOP n = sOP et n = NOP, moyenne * Les tests exacts de Fisher ont été utilisés pour l’analyse statistique Abréviations: AOM, otite moyenne aiguë; NOP, non-otite sujettes; NTHi, Haemophilus influenzae non typable; PIV, virus parainfluenza; VRS, virus respiratoire syncytial; SOP, otite à prédisposition stricte définie; Spn, Streptococcus pneumoniae

Différences de la charge virale chez les enfants SOP et NOP

Le fardeau viral pourrait avoir un impact significatif sur les lésions épithéliales des muqueuses et l’inflammation qui peuvent à leur tour contribuer à l’augmentation de la charge bactérienne otopathogène et des AOM subséquentes. Nous avons constaté que les charges virales RSV étaient plus élevées dans les lavages nasaux des enfants SOP vs NOP. ; Données supplémentaires A Dans l’ensemble, la charge virale de RSVa ou RSVb était plus élevée chez les enfants SOP que chez les enfants NOP Données supplémentaires B, suggérant soit une permissivité différentielle à l’infection ou des réponses immunitaires divergentes entre les populations

Les enfants atteints de SP ont des réponses IgG spécifiques totales moins élevées au VRS, mais pas au VIH

La neutralisation virale médiée par les anticorps est un puissant corrélat du contrôle viral Nous avons trouvé des concentrations plasmatiques d’IgG spécifiques au RSV plus faibles chez les enfants séropositifs que chez les enfants NOP P =; Figure A En revanche, il n’y avait pas de différence dans les titres de hPIV Figure A Nous avons également comparé la fonctionnalité neutralisante des anticorps plasmatiques et constaté que les Ig plasmatiques des enfants atteints de SOP avaient des titres neutralisant le VRS plus faibles que les enfants NOP P =; Figure B Ces résultats indiquent que des niveaux plus bas d’anticorps neutralisants chez les enfants sop à VRS peuvent permettre une réplication virale plus élevée pendant l’infection. Figure B large Décharger la lame Diminuer le virus respiratoire syncytial Virus spécifique du VRS Concentration de l’immunoglobuline G dérivée du plasma IgG anti-VRS et du virus parainfluenza humain de type hPIV chez les enfants atteints de SOP et d’enfants non sujets à l’otite au cours d’une infection active n = sOP ou n = NOP pour chaque espèce virale, moyenne géométrique ± SD B, titre d’IgG plasmatique neutralisante pour RSVa dans les deux groupes d’enfants Moyenne réciproque ± valeurs logarithmiques SD montrées n = sOP ou n = NOP, moyenne ± SD C, Titres d’inhibition de l’hémagglutination pour les hPIV chez les enfants SOP et NOP Moyenne réciproque ± valeurs logarithmiques SD indiquées n = sOP ou n = NOP pour chaque virus, moyenne ± Stud à deux queues SD Les tests ent t ont été utilisés Abréviations: HAI, inhibition de l’hémagglutination; hPIV, type de virus parainfluenza humain; IgG, immunoglobuline G; NOP, non-otite sujettes; VRS, virus respiratoire syncytial; Les anticorps spécifiques du VRS au cours de l’infection sont associés à un contrôle viral plus faible chez les enfants ayant une SOP à tendance otique rigoureusement définie A, Concentration d’anticorps IgG spécifiques du VRS et du virus parainfluenza humain dérivés du plasma IgG spécifiques type hPIV dans SOP et enfants NOP non otites-sujets pendant une infection active n = sOP ou n = NOP pour chaque espèce virale, moyenne géométrique ± SD B, titre d’IgG plasmatique neutralisante pour RSVa dans les deux groupes d’enfants Moyenne réciproque ± SD valeurs logarithmiques indiquées n = sOP ou n = NOP, moyenne ± SD C, titres d’inhibition de l’hémagglutination pour hPIV chez les enfants sOP et NOP moyenne réciproque ± valeur logarithmique SD montrée n = sOP ou n = NOP pour chaque virus, moyenne ± écart-type bilatéral Les tests t de Student ont été utilisés Abréviations: HAI, inhibition de l’hémagglutination; hPIV, type de virus parainfluenza humain; IgG, immunoglobuline G; NOP, non-otite sujettes; VRS, virus respiratoire syncytial; sOP, otites à définition stricte

Niveaux divergents de cytokines pro-inflammatoires dans la muqueuse nasale pendant le RSV et la PIV

Les différences d’inflammation NP chez les enfants SOP et NOP pourraient affecter la fréquence de colonisation des otopathogènes ainsi que le seuil de densité des bactéries capables de causer AOM Nous avons constaté que l’infection par RSV suscitait des niveaux inférieurs d’IL-, IL- β et IL-α par rapport à Enfants infectés par le VIH chez les cohortes SOP et NOP P =; données non affichées

Diminution des réponses des cellules T au VRS chez les enfants SOP

Pour étudier cette possibilité, nous avons étudié l’ampleur des réponses cytokiniques des lymphocytes T CD et CD après une exposition au RSV et nous avons trouvé que les réponses étaient divergentes. réponses plus faibles des cellules T CD avec moins de réponses singulet et polyfonctionnelles au RSV par rapport aux enfants NOP Données supplémentairesB Toutes les cytokines étaient plus faibles chez les enfants atteints de SOP; Certains ont montré une tendance, tandis que d’autres étaient significatifs. Les enfants de SOP ont également eu moins de cellules T CDD supplémentaires. En revanche, aucune différence significative n’a été identifiée dans les cellules T CD ou CD stimulées par le hPIV de SOP ou NOP. Ces données indiquent que les enfants atteints de SP ont moins de réponses T adaptatives au VRS que les enfants atteints de NOP qui pourraient affecter le contrôle viral

Expression inférieure de TLR / sur des cellules présentatrices d’antigène d’enfants SOP

Pour explorer un mécanisme expliquant les réponses diminuées au RSV chez les enfants SOP, nous avons mesuré l’expression de l’ARN relatif des TLRs du complexe majeur d’histocompatibilité de sang isolé classe II-positif MHCII cellules présentatrices d’antigène APCs B, pDCs et mDCs des enfants SOP et NOP avec pas d’URI en cours Nous avons trouvé que l’expression de TLR était inférieure à partir de APC MHCII de SOP par rapport aux enfants NOP P =; Nous avons également examiné l’expression de l’ARN TLR pendant l’infection par RSV et hPIV, en se concentrant sur TLR / expression en raison de son importance lors de l’activation de l’APN monocaténaire. Ces données indiquent que les réponses plus faibles des lymphocytes T chez les enfants SOP peuvent provenir en partie d’une activation plus faible de l’APC par RSV pour déterminer le niveau d’activation des APC dans la PON et le NOP. Nous avons mesuré le changement de l’expression de surface de HLA-DR MFI sur différents types de cellules APC avant et après une infection virale in vitro. Les cellules B des enfants SOP infectés par RSVa présentaient un niveau d’expression de HLA-DR induit plus bas. que les enfants NOP P =; Données complémentairesC D’autres APC infectées par RSVa présentaient une tendance à l’expression HLA-DR induite plus faible chez les enfants sOP. DataC supplémentaire Le même schéma d’expression a été trouvé pour les données RSVb non montrées Les APC infectées par hPIV ont montré une tendance à l’expression HLA-DR induite inférieure dans B cellules parmi les enfants SOP P =; DataD supplémentaire Une fois de plus, cela indique que les enfants atteints de SOP ont des réponses APC plus faibles au RSV qui, à leur tour, affectent leurs réponses T

L’infection virale interfère avec la fonction neutrophile

Nous avons également cherché à mieux comprendre l’interface d’une diminution de la réponse neutralisante Ig au virus et de la réplication virale accrue corrélée à la fonction phagocytaire des neutrophiles au cours de l’AOM. Nous ne nous sommes pas concentrés ici sur les différences potentielles entre les neutrophiles et les NOP. d’une infection virale directement sur la fonction phagocytaire des neutrophiles Des charges virales élevées non neutralisées par Ig dans le NP, comme le montrent les enfants SOP, pourraient permettre au RSV de pénétrer dans l’oreille moyenne et d’infecter les neutrophiles infiltrés ou de les infecter avant de remonter la trompe d’Eustache. oreille moyenne Nous avons constaté que l’infection par le hPIV et le RSV interférait avec la capacité phagocytaire des neutrophiles à ingérer Spn d’une manière dépendante de la dose dans les deux groupes d’enfants présentant les interférences les plus significatives causées par le RSV Figure A et B neutraliser le VRS pourrait perturber la capacité des neutrophiles à engloutir les bactéries respiratoires Fig. ure View largeTélécharger la lameLes infections virales respiratoires interfèrent avec les capacités neutrophiles neutrophiles Les neutrophiles dérivés du sang isolés et infectés par le virus respiratoire syncytial RSVa ou le virus parainfluenza humain de type hPIV dans les multiplicités croissantes de l’infection MOI pendant les heures A, capacités phagocytaires des neutrophiles chez les enfants Les neutrophiles de Streptococcus pneumoniae marqués à la PKH ont été identifiés par un décalage CD n = chaque groupe, un écoulement représentatif étant montré pour chaque groupe avec une MOI de à la fois pour hPIV et RSVa * P & lt; B, Pourcentages de neutrophiles coloration positive pour Spn sur la gamme de MOI testés pour hPIV et RSV * P valeurs sont entre les groupes Mann-Whitney U test a été utilisé pour l’analyse statistique Abréviations: hPIV, type de virus parainfluenza humain; MOI, multiplicité d’infection; VRS, virus respiratoire syncytial; Spn, Streptococcus pneumoniaeFigure View largeTermine de téléchargement Infections virales respiratoires interférant avec les capacités neutrophiles neutrophiles Sang neutrophiles dérivés isolés et infectés par le virus respiratoire syncytial RSV a ou virus parainfluenza humain de type hPIV dans les multiplicités croissantes de l’infection MOI pendant heures A, capacités phagocytaires des neutrophiles des enfants ont été testés avec Streptococcus pneumoniae marqué à la PKH Spn Les neutrophiles ont été identifiés par CD gating n = chaque groupe, flux représentatif indiqué pour chaque groupe avec une MOI à la fois pour hPIV et RSVa * P & lt; B, Pourcentages de neutrophiles coloration positive pour Spn sur la gamme de MOI testés pour hPIV et RSV * P valeurs sont entre les groupes Mann-Whitney U test a été utilisé pour l’analyse statistique Abréviations: hPIV, type de virus parainfluenza humain; MOI, multiplicité d’infection; VRS, virus respiratoire syncytial; Spn, Streptococcus pneumoniae

DISCUSSION

Dans cette étude, nous avons examiné l’association entre les infections virales respiratoires RSV et hPIV et OMA dans une population immunologiquement vulnérable SOP par rapport à une population immunologiquement adaptée à l’âge NOP des enfants À notre connaissance, ceci est la première étude à démontrer une association mécaniste entre RSV L’infection et l’extension d’une infection bactérienne secondaire du NP à une infection locale sous forme d’AOM Les résultats indiquent une diminution des réponses immunitaires innées et adaptatives au RSV chez les enfants SOPNous avons précédemment montré que les enfants SOP ont un profil immunitaire immature ressemblant à un néonatal prolongé -like profil en réponse aux antigènes NTHi et Spn [,,,] Ici, pour la première fois, nous montrons que les charges virales RSV sont plus élevés dans les lavages nasaux des enfants SOP vs NOP au cours d’une OMA, et ce résultat corrélé avec anticorps diminués et réponses immunitaires cellulaires adaptatives Une incapacité à neutraliser la réplication du RSV dans le NP pourrait servir de catalyseur à Eustachia À l’appui de cela, le traitement Ig VRS conduit à une réduction significative des AOM chez les enfants sujets à l’otite Nous avons précédemment constaté que les enfants SOP ont des réponses d’anticorps plus faibles aux antigènes Spn et NTHi. [,,,] et dans cette étude nous ajoutons des réponses anticorps et cellulaires inférieures au RSV, suggérant une déficience globale dans la réponse immunitaire adaptative chez les enfants SOPNous avons trouvé que les enfants SOP avaient des réponses T plus faibles au RSV que les enfants NOP avec moins de singulet Réponses polyfonctionnelles La production d’IL- et d’IFN-γ est associée à une protection contre le RSV alors que les cytokines polyfonctionnelles sont associées à un meilleur contrôle dans plusieurs modèles d’infection. de l’activation des lymphocytes T , différences dans la capacité de stimulation des cellules dendritiques , ou se rapportent à des défauts intrinsèques dans les cellules T des enfants SOPActivatio n des APC dans le cadre de la réponse immunitaire innée joue un rôle important dans la quantité et la qualité de la réponse immunitaire adaptative RSV peut infecter les APC Nous avons trouvé que les APC des enfants sOP ont une expression plus faible du TLR et une expression HLA-DR moindre Au cours des infections à VRS, le TLR est directement impliqué dans l’élimination des infections virales et la génération de réponses adaptatives chez les humains. L’activation virale des CPA pourrait être l’étape préliminaire de la phagocytose précoce des otopathogènes dans le NP et entraîner une réponse effectrice antibactérienne plus précoce. , nous avons montré que le RSV pourrait interférer avec la capacité phagocytaire des neutrophiles à phagocyter Spn d’une manière dose-dépendante D’autres études ont montré que le RSV peut infecter les neutrophiles chez les nourrissons et subir une transcription ; ces infections pourraient perturber la fonction myéloperoxydase des neutrophiles Par conséquent, l’infection par le VRS des neutrophiles peut initier ou encore exacerber la capacité réduite des enfants atteints de SOP à contrôler la réplication des otopathogènes, une notion que nous étudions actuellement.

Remarques

Remerciements Nous remercions le Dr Robert Zagursky pour son assistance éditoriale et Sheldon Perry pour son assistance technique. Soutien financier Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health RDC au MEP et KAI à D VP conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE Divulgation des conflits d’intérêts potentiels Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués