Sommes-nous encore là l’impact de la première norme internationale pour l’ADN de cytomégalovirus sur l’harmonisation des résultats rapportés sur les échantillons de plasma

L’incertitude existe quant à l’harmonisation des résultats réalisable dans les échantillons de plasma des patients en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative qPCR dosages avec des calibrateurs maintenant traçable à la Norme internationale IS de l’Organisation mondiale de la Santé pour les dilutions en série de CMV DNAMethod l’IS et un panel aveugle d’échantillons de plasma regroupés positifs au DNA CMV génotypés et d’échantillons plasmatiques négatifs ont été testés par des laboratoires utilisant des tests qPCR calibrés à l’IS Chaque échantillon clinique a été construit en utilisant le plasma d’un seul receveur unique. les échantillons positifs étaient plus élevés pour les échantillons cliniques médiane, [intervalle, -] log IU / mL que pour les dilutions IS médiane, [range, -] log IU / mL P & lt; ; % de tous les résultats des échantillons cliniques et% des résultats de dilution IS sont inférieurs à ± log UI / mL de la charge virale moyenne de chaque échantillon. La variabilité du résultat n’a pas été affectée par le génotype ou les niveaux quantitatifs d’ADN du CMV. lorsque les réactifs spécifiques aux analytes sont identiques Pour les échantillons cliniques, tous les tests ont démontré un biais de résultat P & lt; Les dosages avec des tailles d’amplicon ≤ bp ont des résultats significativement plus élevés comparés aux dosages avec des tailles d’amplicon plus grandes ≥ bp P & lt; Conclusions La variabilité des résultats de l’ADN du CMV rapportés sur des échantillons individuels a été réduite par le SI, mais la variabilité cliniquement pertinente persiste, empêchant une comparaison significative des résultats inter-essais.

-Mesure de l’ADN du cytomégalovirus humain CMV dans des échantillons de sang périphérique de transplantation d’organes solides SOT et des cellules souches hématopoïétiques souches HSCT en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative Les tests PCR sont devenus une pratique courante dans de nombreux centres de transplantation Ces tests sont utilisés pour diriger des stratégies préventives, diagnostiquer la maladie, surveiller la réponse au traitement et détecter les rechutes, comme marqueurs de substitution de la résistance aux antiviraux du CMV et comme marqueurs de sécurité dans les essais cliniques de nouveaux immunosuppresseurs. Cependant, des études récentes ont démontré une variabilité interassay significative des résultats rapportés sur des échantillons individuels. Ceci rend difficile la comparaison interinstitutionnelle des résultats et le développement de guides de pratique clinique internationaux qui font référence aux charges virales CMV Les souches humaines du CMV présentent des caractères génotypiques significatifs. la diversité, dont la signification clinique est incertaine; Plusieurs systèmes de typage, y compris un système basé sur la diversité d’un gène majeur de la glycoprotéine gB, ont été utilisés pour grouper les souches de CMV Lors du test des échantillons cliniques, des résultats faux négatifs et des changements dans la précision quantitative Résultats de polymorphismes dans les gènes ciblés par les tests CMV Il existe de nombreuses autres raisons potentielles de variabilité dans les résultats de l’ADN CMV, y compris les différences interassays dans les volumes d’entrée, les méthodes d’extraction, la chimie et les réactifs de détection et l’instrumentation Cependant, la variabilité inter-laboratoire des résultats dépasse significativement la variabilité intralaboratoire, suggérant qu’un calibreur de dosage commun peut être une première étape importante dans l’amélioration de l’harmonisation des résultats En réponse à ce besoin, la première Organisation mondiale de la Santé Norme internationale IS pour CMV pour les techniques d’amplification de l’acide nucléique était de développé par l’Institut national pour les normes et le contrôle biologiques NIBSC; Royaume-Uni et approuvé par le Comité OMS d’experts de la Standardisation biologique en octobre Cependant, on ne peut pas supposer que les dosages avec des étalons traçables à ce SI amélioreront l’harmonisation des résultats entre dosages ou estimeront l’ampleur de l’amélioration sans évaluation formelle. une étude pour déterminer la variabilité actuelle des résultats de l’ADN CMV en simulant les conditions requises pour une comparaison interinstitutionnelle significative des résultats. Ces conditions incluaient le test d’un nombre significatif des mêmes échantillons cliniques sur plusieurs sites de tests en laboratoire. de la variabilité continue des résultats ont été identifiés, et les implications cliniques de nos observations sont discutées

Méthodes

Exemples de panneaux

Des échantillons de plasma résiduels restants et normalement jetés après un test de routine pour l’ADN du CMV au laboratoire provincial de santé publique de l’Alberta ont été recueillis et stockés à -0 ° C pour minimiser les effets de matrice et obtenir un volume d’échantillon suffisant. Les échantillons de plasma humains anonymisés positifs pour l’ADN du CMV prélevés sur les receveurs SOT des reins, des poumons, du foie, du cœur et du pancréas et de la greffe de CSH ainsi que des échantillons négatifs pour l’ADN du CMV ont été regroupés. Les concentrations d’ADN du CMV dans les échantillons positifs finaux du panel ont porté sur la plage dynamique de – IU / mL Deux échantillons positifs pour l’ADN du CMV ont été testés deux fois dans le panel en double échantillons. négatif était basé sur les résultats d’un test en laboratoire LDT Génotypage gB o Les isolats de CMV dans les échantillons positifs pour le CMV ont été obtenus en utilisant les méthodes précédemment décrites. Approbation du comité d’éthique de l’Université de l’Alberta pour la création de l’échantillon clinique Numéro de l’étude panel Flacons ProLyophilized de l’OMS pour CMV × UI / Le laboratoire a reconstitué le flacon d’IS lyophilisé en mL de nucléase déminéralisée sans nucléase. l’eau de qualité moléculaire et ensuite utilisé le plasma fourni pour créer des échantillons supplémentaires – dilutions plis, résultant dans les échantillons dans le panel IS × – × UI / ml Tous les échantillons de plasma dans le panneau ont été congelés à – ° C et expédié pendant la nuit sur glace sèche au laboratoire d’essai

Procédures de test et laboratoires d’essais

L’échantillon clinique et les panels IS ont été testés sur différents sites de laboratoire en utilisant des tests développés en laboratoire et des tests commerciaux / réactifs spécifiques à l’analyte ASR, aboutissant à des dosages uniques déjà calibrés par rapport à la table IS. peuvent avoir été identiques, tous les essais étudiés avaient des composants qui différaient Deux laboratoires différents ont testé les panneaux en utilisant des dosages qui avaient des composants identiques majeurs Kit RealStar CMV PCR, Altona Diagnostics, Hambourg, Allemagne ou kit artus CMV RG PCR, Qiagen, Hilden, Allemagne, mais une ou plusieurs étapes de la procédure ont été différées Tous les échantillons du panel ont été décongelés une fois, extraits et testés sans répétitions. Les procédures opératoires standard du laboratoire basées sur les instructions du fabricant ont été suivies, les résultats étant indiqués en unités internationales par millilitre. les procédures d’essai ont été obtenues pour chaque essai

Tableau Caractéristiques du cytomégalovirus Quantitative Polymerase Réaction en chaîne Assaysa Labo Labo Labo Labo Labo Labo Labo Labo Labo Labo Labo Test MultiCode-RTx CMV COBAS AmpliPrep / COBAS Test TaqMan CMV CAP / CTM Kit PCR RealStar CMV Kit RealStar CMV PCR CMV LC-PCR artus CMV RG PCR Kitb Quantitatif TaqMan PCR UL / UL-exon Abbott RealTime CMV artus Kit CMV RG PCR Simplexa Kit CMV Fabricant Luminex Corporation, Madison, WI Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA Altona Diagnostics, Hambourg, Allemagne Altona Diagnostics, Hambourg, Allemagne LDT, Edmonton Canada Qiagen, Hilden, Allemagne LDT Seattle, WA Abbott Molecular, Des Plaines, IL Qiagen, Hilden, Allemagne Focus Diagnostics, Inc, Cypress, CA État de l’enregistrement Commercial, ASR Commercial, Approuvé par la FDA Marquage CE Commercial, Marquage CE Commercial, Marquage CE LDT Commercial, approuvé CE FDA marqué LDT Commercial, marqué CE Commercial, approuvé CE FDA marqué CE Commercial, marqué CE Calibreur d’essai s LD amplicon MP Plasmide MP amplicon MP amplicon LD Plasmide MP amplicon LD plasmide MP Plasmide MP amplicon MP amplicon Gène Cible ADN Polymérase UL ADN polymérase UL confidentiel confidentiel Glycoprotéine B UL MIE Glycoprotéine B UL et IEUL UL UL MIE UL Amplicon sizesbp & lt; & lt; UL, UL UL UL Chimie de sonde Amorces marquées FRET TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan Méthode d’extraction Scorpion labellisée FAM Qiagen EZ Advanced XL Roche COBAS AmpliPrep King Fisher FLex Qiagen QIAcube Qiagen QIAcube Qiagen EZ Advanced Roche MagNa Pure Abbott m Qiagen EZ Advanced XL Kits d’extraction Roche MagNa Pure LC Qiagen EZ Advanced XL Carte de tissu d’ADN Roche COBAS AmpliPrep Kit d’isolation virale King Fisher MagMAX Kit d’ADN Qiagen Mini Kit d’ADN Qiagen Kit de virus Qiagen EZ DSP Roche MagNA ADN pur et petit volume NA Kit de préparation d’échantillons Abbott KIt Qiagen EZQ Virus Mini Kit v Roche MagNa Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit Volume d’entrée du plasma μL μL μL μL μL μL μL μL μL μL Système de détection ABI Prism COBAS Analyseur TaqMan Rotor-Gene / ABI LightCycler Rotor-Gene Q ABI Stepone Abbott m Rotor-Gene Q M Cycleur intégré LOD, log IU / mL NA LOQ, log IU / mL Laboratoire de test Laboratoire Lab Lab Lab Lab Lab Lab Lab Lab Lab Caractéristique du test MultiCode-RTx CMV COBAS AmpliPrep / COBAS Test TaqMan CMV CAP / CTM Kit PCR RealStar CMV Kit RealStar CMV PCR CMV LC-PCR artus CMV RG PCR Kitb Quantitative TaqMan PCR UL / UL-exon Abbott RealTime CMV artus Kit CMV RG PCR Simplexa Kit CMV Fabricant Luminex Corporation, Madison, WI Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA Altona Diagnostics, Hambourg, Allemagne Altona Diagnostics, Hambourg, Allemagne LDT, Edmonton Canada Qiagen, Hilden , Allemagne LDT Seattle, WA Abbott Molecular, Des Plaines, IL Qiagen, Hilden, Allemagne Focus Diagnostics, Inc, Cypress, CA État des inscriptions Commercial, ASR Commercial, Approuvé par la FDA Marquage CE Commercial, Marqué CE Commercial, Marqué CE LDT Commercial, Approuvé par la FDA LDT Commercial, marquage CE Commercial, homologué FDA Marquage CE Commercial, marquage CE Calibreurs d’essai LD amplicon MP Plasmid MP amplicon MP amplicon LD Plasmide MP amplicon LD plasmide MP Plasmide MP amplicon MP amplicon Gène Cible ADN Polymérase UL ADN polymérase UL confidentiel confidentiel Glycoprotéine B UL MIE Glycoprotéine B UL et IEUL UL UL MIE UL Amplicon sizesbp & lt; & lt; UL, UL UL UL Chimie de sonde Amorces marquées FRET TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan TaqMan Méthode d’extraction Scorpion labellisée FAM Qiagen EZ Advanced XL Roche COBAS AmpliPrep King Fisher FLex Qiagen QIAcube Qiagen QIAcube Qiagen EZ Advanced Roche MagNa Pure Abbott m Qiagen EZ Advanced XL Kits d’extraction Roche MagNa Pure LC Qiagen EZ Advanced XL Carte de tissu d’ADN Roche COBAS AmpliPrep Kit d’isolation virale King Fisher MagMAX Kit d’ADN Qiagen Mini Kit d’ADN Qiagen Kit de virus Qiagen EZ DSP Roche MagNA ADN pur et petit volume NA Kit de préparation d’échantillons Abbott KIt Qiagen EZQ Virus Mini Kit v Roche MagNa Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit Volume d’entrée du plasma μL μL μL μL μL μL μL μL μL μL Système de détection ABI Prism COBAS Analyseur TaqMan Rotor-Gene / ABI LightCycler Rotor-Gene Q ABI Stepone Abbott m Rotor-Gene Q M Cycleur intégré LOD, log IU / mL NA LOQ, log IU / mL Abréviations: ASR, réactifs spécifiques de l’analyte; PAC / CTM, essai COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV; CE, Conformité Européenne; CMV, cytomégalovirus; FAM, fluorescéine; FDA, Food and Drug Administration des États-Unis; FRET, transfert d’énergie par résonance de fluorescence; LD, laboratoire développé; LDT, test développé en laboratoire; LOD, limite de détection; LOQ, limite de quantification; MIE, major immédiat immédiat; MP, fabricant fourni; NA, non disponible; PCR, polymerase chain reactiona Adapté de Hayden et al b Le produit a été renommé artus CMV RGQ MDx KitView Large

Analyses statistiques

Tous les résultats de l’ADN du CMV ont été convertis en logarithmes transformés log avant l’analyse Les résultats rapportés comme ADN du CMV détecté mais non quantifiable ont été affectés d’une valeur de UI / mL inférieure à la limite de quantification auto-déclarée pour les tests de test; La valeur déclarée a été utilisée lorsque les résultats ont été rapportés quantitativement, même lorsque la LQ du test était inférieure à la LOQ. L’écart type et l’écart-type SD ont été calculés. Le test de Levene, l’analyse de variance ANOVA et le test HSD Tukey ont été utilisés pour comparer les résultats. et un logiciel R a été utilisé pour l’analyse. Le test par paires appariées à un niveau de signification a été utilisé pour évaluer les tests de biais de résultat significatifs par rapport à la moyenne de tous les résultats de log pour chaque échantillon.

RÉSULTATS

Caractéristiques du test

Les détails des procédures de mesure de l’ADN du CMV humain pour chaque essai, y compris la technique d’extraction d’acide nucléique utilisée, le volume d’entrée du plasma, la cible du gène, la chimie de la sonde, la méthode de détection et la limite de détection sont résumés dans le tableau.

QUI EST Les résultats des tests qualitatifs des panels et des panels cliniques

Il manquait des résultats pour l’échantillon IS non dilué, en raison d’un volume insuffisant et d’un résultat invalide. Pour le panel d’échantillons cliniques, il manquait un résultat dû à une erreur de processus Deux résultats faussement négatifs et un faux résultat positif ont été observés. dosages Tous les tests ont été capables de détecter l’ADN du CMV dans tous les échantillons cliniques et IS positifs avec des charges virales moyennes & lt; log IU / mL

QUI EST Les résultats des tests quantitatifs du panel

Les résultats rapportés pour le panel IS de l’OMS par rapport au résultat attendu basé sur la valeur assignée à l’OMS IS [× IU / mL] sont résumés dans la figure. Parmi les résultats rapportés,% tombent dans ± log UI / mL gamme de la moyenne de tous Les résultats d’analyse et de% correspondent à ± log UI / mL du résultat attendu bronchiolite. La variance pour les échantillons individuels est définie comme la différence entre le résultat le plus élevé et le résultat le plus bas exprimés en log UI / mL La variance médiane pour les dilutions Le panel était une plage log IU / mL, – log IU / mL Pour le panel IS, des tests RealStar CMV-D-Lab, RealStar CMV-D-Lab, RealTime CMV-C-Lab, COBAS AmpliPrep / COBAS Test TaqMan CMV [ CAP / CTM] -G-Lab, MultiCode-RTx CMV-E-Lab, LDT-B-Lab a un biais de résultat par rapport à la valeur attendue P & lt; , test t apparié-échantillons

Les résultats attendus pour les échantillons de panel ont été calculés en utilisant la valeur consensuelle assignée à l’ISM HCMV non dilué IS x UI / mL ou log IU / mL La ligne noire continue est la ligne d’identité observée = attendue Abréviations: CAP / CTM, COBAS AmpliPrep / COBAS Test de TaqMan CMV; CMV, cytomégalovirus; Le test du cytomégalovirus humain OMS HCMV International Standard IS testé en utilisant des tests Les valeurs attendues pour les échantillons de panel ont été calculées en utilisant la valeur consensuelle attribuée à l’OMS HCMV non dilué. × IU / mL ou log IU / mL La ligne noire continue est la ligne d’identité observée = attendue Abréviations: CAP / CTM, COBAS AmpliPrep / COBAS Test de TaqMan CMV; CMV, cytomégalovirus; LDT, test développé en laboratoire

Résultats des tests quantitatifs du panel d’échantillons cliniques

La gamme dynamique couverte par les échantillons cliniques ADN-positifs du CMV basée sur la moyenne de tous les résultats log-transformés pour chaque échantillon était – log IU / mL Tous les échantillons positifs pour l’ADN du CMV ont été génotypés avec la répartition des résultats suivante:% / gB,% / gB,% / génotype mixte gB prédominant,% / gB et% / gB Les résultats quantitatifs de l’ADN du CMV pour chaque échantillon testé par chaque test sont résumés dans la figure et la figure supplémentaire. Les résultats faussement négatifs ont été exclus des analyses. tous les échantillons positifs à l’ADN du CMV, de%, se situaient à ± log UI / mL de la moyenne de tous les résultats pour l’échantillon testé. La variance pour les échantillons cliniques individuels positifs pour l’ADN du CMV était plus élevée que [U, U] celui observé pour les dilutions IS P & lt; Les résultats n’étaient pas significativement différents lorsque des résultats détectables mais non quantifiables ont été exclus de l’analyse. Pour le panel d’échantillons cliniques, tous les tests ont démontré un biais de résultat par rapport au résultat moyen pour chaque échantillon du panel P & lt; , t-test en paires

Figure Vue largeDownload slideVariabilité des résultats pour les échantillons cytomégalovirus CMV ADN-positifs dans le panel de tests cliniques triés par dosage utilisé Les tests utilisés sont arrangés en augmentant la taille des amplicons bp des gènes ciblés La variation pour chaque échantillon est exprimée comme une différence entre le résultat et la moyenne pour cette valeur d’échantillon Deux résultats faux négatifs ont été exclus La zone ombrée met en évidence des résultats se situant dans ± log UI / mL de la moyenne Abréviations: CAP / CTM, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Test; LDT, test en laboratoire testFigure View largeDownload slideVariabilité des résultats pour cytomégalovirus CMV échantillons ADN-positifs dans le panel de tests cliniques triés par dosage utilisé Les tests utilisés sont arrangés en augmentant la taille de l’amplicon bp des gènes ciblés La variation pour chaque échantillon est exprimée en valeur C’est la différence entre le résultat et la moyenne pour cette valeur de l’échantillon Deux résultats faux négatifs ont été exclus La zone ombrée met en évidence les résultats se situant dans ± log UI / mL de la moyenne Abréviations: CAP / CTM, COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV Test; LDT, test développé en laboratoire

Facteurs influençant la variabilité des résultats rapportés

Pour les ensembles d’échantillons dupliqués dans le panel d’échantillons cliniques, une variation significativement moins importante des résultats a été rapportée dans un laboratoire intralaboratoire que parmi les laboratoires, un test ANOVA inter-laboratoires, les deux échantillons en double P & lt; ; Figure

Figure Vue largeDownload slideInterlaboratoire et intralaboratoire variation dans les résultats sur les échantillons S, S dupliqué dans le panel échantillon clinique Variation pour chaque échantillon dans la comparaison interlaboratoire est exprimée comme une valeur qui est la différence entre le résultat et la moyenne pour cette valeur échantillon la comparaison intralaboratoire, la variation est exprimée pour chaque test comme une valeur qui est la différence entre chaque résultat et la moyenne des résultats pour cette valeur de l’échantillon Le résultat moyen était gamme, – log UI / mL pour S et gamme, – log UI / mL pour S Abréviation: GM, géométrie moyenneFigure Voir grandDisque de téléchargement Variation interspécifique et intralaboratoire des résultats sur les échantillons S, S dupliqués dans le panel d’échantillons cliniques La variation pour chaque échantillon dans la comparaison interlaboratoire est exprimée comme une valeur qui est la différence entre le résultat et la moyenne pour cette valeur d’échantillon Pour la comparaison intralaboratoire, la variation est exprimée pour chaque dosage ue qui est la différence entre chaque résultat et la moyenne des résultats pour cette valeur de l’échantillon Le résultat moyen était gamme, – log UI / mL pour S et gamme, – log UI / mL pour S Abréviation: GM, moyenne géométrique n’a pas été significativement affectée par la quantité d’ADN du CMV dans l’échantillon. P = ou gB génotype P =, test de Levene Figures A et B supplémentaires Cependant, une tendance vers une plus grande variabilité dans les résultats rapportés a été observée pour le génotype gB. rapportés en utilisant le test CAP / CTM pour les échantillons gB & gt; log IU / mL différence de la charge virale moyenne pour chaque échantillon; Figure

Figure Vue largeDownload slideCytomegalovirus Mesures d’ADN CMV des échantillons de génotype gB testés en utilisant les tests Les échantillons sont triés en augmentant les valeurs moyennes de tous les résultats rapportés pour l’échantillon Sous-quantification significative de certains échantillons par un test COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan CMV [CAP / CTM] est mis en évidence Abréviation: LDT, test-test développé en laboratoire View largeTélécharger la lameCytomegalovirus CMV Mesures d’ADN des échantillons de génotype gB testés en utilisant les tests Les échantillons sont triés en augmentant les valeurs moyennes de tous les résultats rapportés pour l’échantillon. Le test COBAS TaqMan CMV [CAP / CTM] est en surbrillance Abréviation: LDT, test développé en laboratoire Dans les échantillons cliniques, les résultats des essais avec des amplicons ≤ bp étaient significativement différents par rapport aux tests avec amplicons ≥ bp P & lt; et ≥ bp P & lt; Test HSD de Tukey Dans le panel d’échantillons cliniques, on a observé une tendance vers des résultats d’ADN CMV quantitatifs plus élevés lors de l’utilisation de tests avec des tailles d’amplicon de plus en plus petites. L’impact sur les résultats rapportés par différents laboratoires lorsque les composants des procédures de test sont modifiés, même lorsque les mêmes réactifs commerciaux sont utilisés, est résumé pour le kit RealStar CMV PCR Figure A et l’artus CMV RG PCR Kit Figure B

Figure Vue grandDownload slideExemples de résultats de sites de test utilisant la réaction en chaîne du polymérase CMV RealStar cytomegalovirus PCR Kit A mais avec différentes techniques d’extraction d’acide nucléique, le volume d’entrée du plasma et le système de détection La différence médiane dans les résultats rapportés pour chaque échantillon log IU / mL Test de différence significative de Tukey [HSD], P & lt; B, Le kit artus CMV RG PCR lorsque seuls les volumes d’entrée plasmatique différaient La différence médiane dans les résultats rapportés pour chaque échantillon individuel était seulement la plage, – à log IU / mL test Tukey HSD, P & gt; Figure Vue grandDownload slideExemples de résultats de sites de test utilisant la réaction en chaîne du polymérase CMV RealStar cytomegalovirus PCR Kit A mais avec différentes techniques d’extraction d’acide nucléique, le volume d’entrée du plasma et le système de détection La différence médiane dans les résultats rapportés pour chaque échantillon log IU / mL Test de différence significative de Tukey [HSD], P & lt; B, Le kit artus CMV RG PCR lorsque seuls les volumes d’entrée plasmatique différaient La différence médiane dans les résultats rapportés pour chaque échantillon individuel était seulement la plage, – à log IU / mL test Tukey HSD, P & gt;

DISCUSSION

des méthodes d’analyse de gression et de correspondance pour l’évaluation de l’ADN du CMV pour une propriété importante pour l’harmonisation des résultats connue sous le nom de commutabilité ; ceci a été rapporté séparément Dans cette analyse, nous avons constaté que l’OMS a démontré une commutabilité faible ou absente dans jusqu’à% des dosages utilisés dans notre étude Dans l’analyse décrite ici, nous avons observé que la taille d’un amplicon impacte la mesure de l’ADN du CMV Ceci suggère que la forme biologique de l’ADN du CMV dans l’ADN fragmenté plasmatique peut différer des fragments d’ADN du CMV et des concatémères plus longs trouvés dans le matériel dérivé de la culture tissulaire tel que le SI OMS, ce qui pourrait expliquer l’absence de commutabilité de l’IS pour certains tests ont mis en évidence l’impact de l’efficacité variable des techniques d’extraction des acides nucléiques sur la quantification de l’ADN du CMV dans des échantillons de plasma [,, -] Ceci peut avoir contribué significativement aux différences ont utilisé le même kit ASR RealStar CMV PCR mais différentes techniques d’extraction des acides nucléiques. Notre expérience avec les tests d’échantillons cliniques utilisant le kit artus CMV RG PCR sur les sites de laboratoire suggère que de petites différences dans le volume d’entrée du plasma ne peuvent pas affecter significativement la quantification de l’ADN du CMV si toutes les autres étapes de la procédure sont identiques. En utilisant le système de typage gB, nous n’avons pas observé de différences significatives dans la variabilité des résultats entre les génotypes. L’utilisation de cibles à double gène dans les dosages de nos L’étude représente une stratégie pour atténuer ce risque Nos données suggèrent que le test CAP / CTM pourrait sous-quantifier certains isolats de gB Cependant, le nombre d’isolats dans un sous-groupe gB était faible, et notre étude n’a pas la puissance requise pour explorer précisément le génotype comme cause de la variabilité des résultatsNos résultats d’étude ont des implications pour les maladies infectieuses, les médecins de laboratoire et de transplantation, assa Les échantillons aveugles dans les panels de compétences utilisés par les laboratoires pour l’assurance qualité sont presque toujours construits artificiellement en utilisant des isolats cultivés en culture tissulaire. Notre étude suggère que cette approche peut significativement sous-estimer la variabilité des résultats lorsque les échantillons cliniques sont testés. Bien que dans le cas du CMV, l’obtention d’un volume suffisant de matériel à cet effet peut être difficile Bien que les tests en laboratoire puissent très bien fonctionner, au niveau international, une utilisation plus commerciale du test faciliterait l’évaluation continue de l’inter-essai. Harmonisation des résultats Les médecins de greffe surveillant des patients individuels ou participant à des essais cliniques doivent utiliser le même test effectué dans le même laboratoire pour assurer une interprétation appropriée des changements de la charge virale. Notre étude et d’autres suggèrent que dans des essais cliniques ou des l’échange de données entre laboratoires peut être possible si le même essai commercial est utilisé et si toutes les étapes de traitement et d’essai sont identiques; cela nécessite une validation plus poussée La variabilité continue des résultats inter-essais continue d’interdire l’établissement de points de déclenchement pour la thérapie préemptive, les paramètres de traitement et les comparaisons d’autres paramètres de charges virales qui peuvent être universellement appliqués; Les fabricants de tests doivent normaliser et optimiser toutes les étapes de leurs procédures d’analyse Bien que l’utilisation des ASR combinée à une variété de techniques d’extraction des acides nucléiques et de systèmes de détection offre aux laboratoires une flexibilité et une meilleure utilisation des ressources disponibles, cette approche Les résultats de notre étude sont spécifiques de l’ADN du CMV mesuré dans le plasma et ne doivent pas être extrapolés à d’autres matrices telles que comme sang total, liquide céphalorachidien, liquide de lavage broncho-alvéolaire, urine ou liquide amniotique où les effets de la matrice et la forme biologique de l’ADN du CMV peuvent différer Les limites de notre étude comprennent notre incapacité à contrôler la variabilité induite par l’opérateur et les petits volumes d’échantillons En résumé, nous n’en sommes pas encore là Nous n’avons pas atteint les limites cliniquement acceptables d’harmonisation des résultats pour la mesure de l’ADN du CMV dans le plasma parmi les dosages étudiés qui utilisaient des calibrateurs traçables à l’OMS. significativement plus près de cet objectif et nous permettra d’étudier plus efficacement d’autres facteurs contribuant à la variabilité continue des résultats

Remarques

Groupe d’étude sur l’harmonisation des résultats du CMV Dr Randall Hayden, Jeanne Carr, Département de pathologie de Sri Suganda, Hôpital de recherche pour enfants St Jude, Memphis, Tennessee; Dr Astrid Petrich, Nursrin Dewsi Département de médecine de laboratoire pédiatrique, Hospital for Sick Children, Toronto, Canada; Linda Cook Département de médecine de laboratoire, Université de Washington, Seattle; Dr Angela Caliendo, Université Jessica Ingersoll Emory, Atlanta, Géorgie; Brian Yu, Heather Gregson, Focus Diagnostics Inc, Cypress (Californie); et Dr Jutta Preiksaitis, Dr Xaio-Li Pang, Dr Yupin Tong Université de l’Alberta, Edmonton Remerciements Nous remercions également Min Cao et le Laboratoire provincial de santé publique pour le traitement et la fourniture d’échantillons; Curtis Mabilangan et Michael Akiwumi, Université de l’Alberta, pour leur aide dans l’analyse de données; l’Institut national pour les normes et le contrôle biologiques (NIBSC), qui a fourni la première Norme internationale de l’Organisation mondiale de la santé pour l’ADN du cytomégalovirus humain HCMV; et Roche Diagnostics, Altona Diagnostics, Abbott Molecular et Qiagen pour fournir des kits de test. Conflits d’intérêts potentiels JFF et ABH ont été employés par le NIBSC, qui a produit et fourni le standard international pour HCMV BY est un employé de Focus Diagnostics. conflits Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels de conflits d’intérêts que les éditeurs considèrent comme pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués