Déclin de l’activité enzymatique des enzymes des neutrophiles est un facteur pronostique pour les infections chez les patients atteints de syndrome myélodysplasique

Nous avons utilisé la cytométrie de flux pour mesurer les activités de la cathepsine G et de l’élastase L’activité de l’élastase chez les neutrophiles de patients atteints de syndrome myélodysplasique MDS était significativement plus faible que celle des neutrophiles du groupe témoin P & lt; Les patients ayant une faible activité élastase étaient significativement sensibles à l’infection P & lt; Notre étude suggère que l’analyse des enzymes antibactériennes est utile dans l’évaluation du pronostic des patients atteints de SMD

utrophils de patients atteints de MDS ont été rapportés et MDS se caractérise par une cytopénie et dysplasie des cellules hématopoïétiques Récemment, il est devenu possible de mesurer une activité de la protéase dans les cellules intactes individuelles par l’utilisation de CellProbe Beckman Coulter, Fullerton, CA cathepsine G et l’élastase sont des protéases dans les granules azurophiles qui tuent les bactéries Nous avons mesuré l’activité de la cathepsine G et l’élastase de cet essai sensible pour déterminer le niveau d’activité de ces composants dans les neutrophiles de patients atteints de sang MDSVenous a été appelée dans une solution-citrate-dextrose acide chez les patients ayant une tranche d’âge MDS, – années; moyenne, années, patients atteints de leucémie myéloïde aiguë post-MDS AML; tranche d’âge, – années; moyenne, années et volontaires en bonne santé âge, années; moyenne, années Les patients ayant eu une infection, recevant un médicament ou ayant eu des complications graves dans le passé ont été exclus de cette étude. Les sous-types de patients, selon les critères FAB français-américano-britanniques, étaient les suivants: réfractaire anémie RA, patients; RA avec excès de blastes RAEB, patients; RAEB en transformation RAEBt, patients Il y avait des hommes et des femmes avec MDS, et des hommes et des femmes avec AML post-MDS Tous les volontaires sains ont été examinés pour exclure la présence de maladie ou de médicaments. La mesure de l’activité enzymatique intracellulaire a été réalisée avec CellProbe Beckman Coulter. ,] TP-cathepsine et CellProbe AAPV-élastase ont été achetés auprès de Beekman Coulter CellProbe est une membrane perméable Il comprend des substrats enzymatiques marqués avec des colorants fluorescents Il est fluorescent pas jusqu’à ce que les colorants sont libérés à partir de substrats par ces enzymes Ensuite, l’intensité de la fluorescence indique le nombre de produits transformés à partir des substrats Les neutrophiles ont été lavés avec des temps PBS Un échantillon de μL a été incubé pendant min à ° C Vingt-cinq microlitres de CellProbe ont été ajoutés avant incubation pendant une minute supplémentaire à ° C La réaction a été stoppée sur de la glace Q-Prep Beckman Coulter pour lyser les érythrocytes Discrimination de la forme segmentée et bande de granulocyte SEV, est fait par l’utilisation de la technique de cytométrie de flux de mesure d’angle vers l’avant cellulaire et ° diffusion de la lumière La fluorescence émise a été contrôlée à l’aide du flux EPICS XL Beckman Coulter Le réglage du cytomètre de flux a été réglé par Flow-Check Beckman Coulter, et l’intensité de fluorescence a été standardisé pour chaque dosage en utilisant un Flow-Set Beckman Coulter pour maintenir la reproductibilité au jour le jour. L’activité enzymatique a été quantifiée en tant qu’intensité de fluorescence moyenne. Les valeurs ont été exprimées en tant que rapport d’intensité de fluorescence accrue. le test U de Mann-Whitney a été utilisé, et P ⩽ a été considéré comme significatif. Les erreurs dans les mesures sur différents jours chez un volontaire donné ont été vérifiées chez d’autres volontaires et incluses entre la moyenne plus deux fois l’écart type SD et la moyenne moins activités SD chez les patients En dehors de cette fourchette, on a défini des parcelles anormales de Kaplan-Meier pour analyser le pronostic Toutes les analyses ont été effectuées de manière prospective, à l’exception de quelques patients qui avaient déjà été suivis pendant quelques années sans médicaments ni complications graves. Le test with avec correction de Yate a également été utilisé pour évaluer la fréquence de l’infection. une température axillaire de la fièvre, ⩾ ° C de ⩾ jours et une focalisation apparente L’activité de l’élastase exprimée en intensité de fluorescence chez les neutrophiles de patients avec MDS était significativement plus faible que celle des échantillons de volontaires témoins sains P & lt; ; Bien qu’il n’y avait pas de différence significative dans l’activité de la cathepsine G entre les patients atteints de MDS et les sujets témoins, une activité de la cathepsine G significativement plus élevée a été démontrée chez les patients atteints de PR que dans le groupe témoin P & lt; ; Il n’y avait pas de corrélation significative avec l’âge dans les activités enzymatiques de la cathepsine G et de l’élastase chez les patients non montrés, ce qui indique des activités anormales sans rapport avec l’âge L’erreur type pour les patients avec MDS était nettement plus grande que celle du groupe témoin Il y avait quelques patients dans les groupes à haut risque par exemple, les patients avec RAEB et RAEBt avec des données d’activité de cathepsine G notablement basses non montrées La faible activité de n’importe quelle enzyme n’était pas corrélée avec les données de dégranulation morphologique non montrées L’activité élastase chez les patients avec RA était significativement plus faible Les valeurs anormales sont revenues à des niveaux proches de la normale dans le groupe de patients à risque élevé RAEB, RAEBt et AML post-MDS. Aucune altération des activités des enzymes n’a été notée parmi les groupes, selon les données du groupe témoin. définitions du Système international de notation pronostique IPSS ; données non montrées Ces données, analysées par le test t de Student, ont été analysées plus avant selon le test U de Mann-Whitney pour confirmer les différences significatives

Figure Vue largeTélécharger la diapositive Activités enzymatiques dans les granules neutrophiles des patients atteints de syndrome myélodysplasique MDS et leucémie aiguë myéloïde post-SDM Barres étiquetées C désignent des échantillons témoins de volontaires normaux Les activités dans la cathepsine G A et l’élastase B sont montrées * P & lt; et §P & lt; , par le test t de Student et confirmé par le test U de Mann-WhitneyFigure Voir grandTélécharger la diapositive Activités enzymatiques dans les granules neutrophiles des patients atteints de syndrome myélodysplasique MDS et leucémie aiguë myéloïde post-SDM Barres étiquetées C désignent des échantillons témoins de volontaires normaux Activités dans la cathepsine GA et l’élastase B sont montrés * P & lt; et §P & lt; , par test t de Student et confirmé par le test U de Mann-Whitney

Figure Vue largeTélécharger la diapositive Activités enzymatiques dans les granules neutrophiles des patients avec chaque sous-type de syndrome myélodysplasique MDS et post-MDS aiguë leucémie myéloïde overt Barres étiquetées C dénotent des échantillons témoins de volontaires normaux Les activités dans la cathepsine G A et l’élastase B sont montrées #P & lt; , * P & lt; et ** P & lt; , par le test t de Student et confirmé par le test U de Mann-Whitney RA, l’anémie réfractaire; RAEB, anémie réfractaire avec excès de blastes; RAEBt, anémie réfractaire avec excès de blastes en transformationFigure Voir grandTélécharger la diapositiveActivités enzymatiques dans les granules neutrophiles des patients avec chaque sous-type de syndrome myélodysplasique MDS et leucémie aiguë myéloïde post-MDS Barres étiquetées C dénotent des échantillons témoins de volontaires normaux Activités dans la cathepsine GA et l’élastase B sont montrés #P & lt; , * P & lt; et ** P & lt; , par le test t de Student et confirmé par le test U de Mann-Whitney RA, l’anémie réfractaire; RAEB, anémie réfractaire avec excès de blastes; RAEBt, anémie réfractaire avec excès de blastes en transformationPatients chez qui l’élastase avait une activité inférieure à la valeur moyenne moins SD avait une probabilité significativement plus élevée d’infection Figure Les patients atteints de LMA post-MDS n’étaient pas inclus dans l’analyse Moyennes de la fréquence annuelle d’infection la période d’observation a également été analysée La majorité des patients ayant une diminution des activités de l’élastase avait & gt; infection par an par rapport aux patients sans aucun tableau de diminution Il y avait des épisodes d’infection chez les patients, dont la pneumonie Deux autres infections chez les patients étaient des abcès sous-cutanés Les autres étaient des infections septiques Il y avait des infections chez les patients neutropéniques neutrophiles & lt; / mm et chez les patients sans neutropénie

Figure Vue largeDownload slideIncidence de l’infection chez les patients présentant une diminution de l’activité de la ligne pointillée de l’élastase, et chez les patients sans diminution de la ligne continue de l’activité; Kaplan-Meier parcelle P & lt; , par le test du log-rankFigure View largeTélécharger la lameIncidence de l’infection chez les patients présentant une diminution de l’activité de la ligne pointillée de l’élastase, et chez les patients sans diminution de l’activité ligne continue; Kaplan-Meier parcelle P & lt; , par le test du log-rank

Diapositive entre les activités de l’élastase et la fréquence de l’infection chez les patients atteints de syndrome myélodysplasiqueTable View largeDownload slideRelationship entre les activités d’élastase et la fréquence d’infection chez les patients atteints de syndrome myélodysplasiqueBien qu’aucune différence significative n’a été démontrée dans le taux de survie du groupe de patients Elastase seule données non montrées, le groupe de patients chez qui l’activité de la cathepsine G ou élastase était inférieure à la valeur moyenne moins SD avait un taux de survie significativement plus faible

Certains patients atteints de SMD ont également été signalés avoir des neutrophiles dysfonctionnels Elastase et cathepsine G dans les granules primaires de neutrophiles sont connus pour avoir des activités antibiotiques in vitro Bien qu’il n’y ait aucune preuve directe que ces enzymes ont un rôle critique dans les mécanismes de défense de l’hôte, l’absence d’activités de l’élastase et de la cathepsine G chez la souris a été suggérée comme explication de leur sensibilité à l’infection L’activité de la cathepsine G était également plus faible chez les rats présentant une carence en vitamine A Le contenu granulaire des neutrophiles, tels que la cathepsine G et l’élastase, peut jouer un rôle important dans la défense de l’hôte. Les résultats d’une étude antérieure utilisant des anticorps monoclonaux suggèrent que les neutrophiles du SMD présentent des anomalies dans leurs teneurs granulaires. activité des enzymes granulaires des neutrophiles dans MDSHere nous démontrons les activités des enzymes impliquées dans la bactérie Mécanisme de destruction ial Les deux poussées respiratoires, qui sont impliquées dans le mécanisme dépendant de l’oxygène, et la libération d’enzymes granulaires, impliquées dans le mécanisme indépendant de l’oxygène, sont essentielles pour tuer les micro-organismes ici. L’infection est l’une des principales causes de décès Avec MDS Bien que l’on sache que la neutropénie est l’un des facteurs de risque d’infection chez les patients atteints de MDS, nous avons observé un nombre presque égal d’épisodes d’infection chez des patients avec et sans neutropénie. Notre rapport précédent a suggéré que la sensibilité à l’infection est également causée par une diminution de la production de superoxyde Il est facile de spéculer qu’une diminution de l’activité enzymatique granulaire augmente l’incidence de l’infection.Dans ce rapport, nous avons démontré une diminution de l’activité dans l’élastase, qui est l’une des figures de contenu granulaire azurophile Bien que l’activité de cath Les patients présentant une diminution de l’activité de l’élastase ont montré une sensibilité significative aux chiffres et aux tableaux d’infection, ce qui indique que l’altération de l’activité enzymatique granulaire était liée à la susceptibilité aux patients atteints d’une MDS. En outre, les patients ayant une activité réduite de la cathepsine G ou de l’élastase ont un taux de survie significativement faible. La plupart de ces patients sont morts d’une infection, tandis que d’autres ont développé une leucémie. Afin d’améliorer le pronostic Notre étude met en évidence que l’altération de l’activité des teneurs en granules azurophiles est un facteur pronostique. Nous avons analysé l’activité enzymatique de chaque groupe selon les critères FAB. Une activité accrue de la cathepsine G et une diminution de l’activité de l’élastase ont été observées. groupes à haut risque, su Comme chez les patients atteints de RAEB, RAEBt ou de leucémie manifeste, les activités de la cathepsine G et de l’élastase étaient proches de leurs activités dans le groupe témoin. La raison en est peu claire. Comme le montrent les figures et certains patients présentant une altération fonctionnelle antibactérienne. Les patients ayant des fonctions normales dans les neutrophiles peuvent survivre après la progression vers un groupe à haut risque La majorité des patients dans les groupes à haut risque, puis, révèlent une activité normale, et les patients à faible risque Une autre explication est que les groupes à faible risque et les groupes à haut risque peuvent avoir différentes catégories de maladies, car le syndrome myélodysplasique est toujours un syndrome. Les patients atteints de RAEB et de RAEBt peuvent être proches d’une leucémie, alors que de nombreux patients pas de progrès La raison du niveau élevé d’activité de la cathepsine G chez certains patients n’est pas claire En plus de l’activité antimicrobienne, la cathepsine G a été rapporté avoir des rôles dans la régulation des réponses inflammatoires , la dégradation de la matrice extracellulaire , le contrôle de la pression sanguine par les angiotensines I et II , l’induction de la thrombogenèse , et la libération de activateur plasmalogène des cellules endothéliales L’activité accrue de la cathepsine G peut avoir une certaine influence sur l’homéostasie, et cela peut être l’une des caractéristiques anormales des fonctions cellulaires des stratégies MDSherapeutic pour les patients atteints de MDS sont encore controversées. anormalité mais aussi déclin de diverses fonctions cellulaires dans MDS Notre étude a démontré qu’en analysant des enzymes antibactériennes dans des granules azurophiles, en plus de l’utilisation d’autres systèmes de score comme IPSS , de nouvelles informations pronostiques sont disponibles pour estimer le pronostic infectieux des patients atteints de SMD La surveillance des fonctions neutrophiles dans les SMD peut être utile pour améliorer le pronostic de ces patients. ents

Remerciements

Nous sommes reconnaissants à Ayako Hirota du Premier Département de médecine interne de l’Université médicale de Tokyo, Japon, pour son excellente assistance technique. Nous sommes également redevables à Patrick Barron et Takako Kojima du Centre international de communication médicale de l’Université médicale de Tokyo, Japon. leur revue de ce manuscrit