L’infection par le cytomégalovirus du cœur est fréquente chez les patients atteints de myocardite mortelle

Contexte Bien que les entérovirus et les adénovirus soient considérés comme les principales causes de la myocardite clinique généralement bénigne, on en sait peu sur l’étiologie des myocardites sévères ou mortelles. Nous avons recueilli tous les dossiers cliniques et tous les autopsies myocardiques chez les patients ayant une myocardite. de décès en Finlande au cours de la période de – Résultats pour tous les patients disponibles hommes et femmes; Douze sujets morts accidentellement ont servi de sujets témoins Réaction en chaîne par polymérase Des tests de PCR et d’hybridation in situ ont été utilisés pour la détection des génomes viraux adénovirus, cytomégalovirus , les virus de l’influenza A et B, le parvovirus B et le rhinovirus dans les échantillons cardiaquesRésultats Les acides nucléiques viraux ont été retrouvés dans le cœur des patients%, y compris les patients atteints de cytomégalovirus, les patients atteints de parvovirus B, les patients entérovirus et les herpesvirus humains. Aucun adénovirus, rhinovirus ou virus de la grippe n’a été détecté dans cette étude sur la myocardite mortelle. En% des patients pour lesquels la PCR était positive pour le cytomégalovirus, l’hybridation in situ a révélé la présence d’ADN viral dans les cardiomyocytes. de ces patients était immunocompromis dans le contrôle Conclusions: Dans cette étude de population, le cytomégalovirus est le résultat le plus fréquent chez les patients immunocompétents atteints de myocardite mortelle. Ceci peut avoir des implications cliniques importantes pour le traitement de la myocardite aiguë sévère.

La myocardite aiguë est principalement une maladie subclinique ou spontanément résolutive Cependant, elle peut entraîner une insuffisance cardiaque progressive ou une mort subite Bien que les infections bactériennes et parasitaires et les agents toxiques puissent causer la myocardite, dans le monde occidental, c’est le plus souvent associées aux infections virales Les entérovirus ont été proposés pour être la cause la plus fréquente de myocardite aiguë D’autres virus qui causent la myocardite comprennent les adénovirus et les virus grippaux Aussi, l’infection par parvovirus B est parfois associée à une myocardite. la famille Herpesviridae, le cytomégalovirus CMV , et l’herpèsvirus humain HHV- ont parfois été associés à une myocardite Chez les patients immunodéprimés et les transplantés cardiaques, le CMV est une cause fréquente d’infection cardiaque Bien que les causes de la myocardite clinique bénigne ont été largement étudiés , l’étiologie de la myocardite sévère ou mortelle est restée obscure Nous avons entrepris d’étudier l’étiologie virale de la myocardite mortelle dans une étude rétrospective basée sur la population utilisant la PCR et les méthodes d’hybridation in situ

Méthodes

Patients et échantillons Nous avons recueilli tous les certificats de décès avec une myocardite enregistrée comme cause initiale de décès en Finlande n = dans la base de données de Statistics Finland. Des protocoles d’autopsie, des dossiers hospitaliers et des échantillons d’autopsie myocardique ont été demandés pour ces cas. cas De ceux-ci, les résultats pour tous les patients hommes et femmes; âge médian, années; les critères histopathologiques de Dallas pour la myocardite active en réanalyse histopathologique et dont les échantillons d’autopsie myocardique contenaient des acides nucléiques conservés détectés comme décrit dans «Analyses moléculaires» ont été inclus dans cette étude. Les caractéristiques cliniques ont été évaluées rétrospectivement utilisation des dossiers hospitaliers et de toutes les autres informations cliniques disponibles Dix-huit sujets appariés selon l’âge et le sexe qui sont décédés accidentellement ont été sélectionnés pour le groupe de contrôle échantillons d’autopsie myocardique obtenus chez des sujets témoins hommes et femmes; âge médian, années; La Commission d’éthique locale et le Ministère finlandais des Affaires sociales et de la Santé ont approuvé la conduite de l’étude.

Figure Vue largeTéléchargement de diapositive Caractéristiques histologiques de la myocardite, y compris l’infiltrat inflammatoire et la nécrose myocytaire, chez une femme âgée de neuf ans décédée d’une insuffisance cardiaque progressive des semaines après l’apparition d’une douleur thoracique et d’une dyspnée chez une patiente. infiltration et nécrose myocytaire chez une femme âgée de plusieurs semaines décédée d’une insuffisance cardiaque progressive des semaines après l’apparition d’une douleur thoracique et d’une dyspnée chez un patient. Extraction d’acide nucléique Des coupes de 5 μm ont été pratiquées sur des tissus cardiaques inclus en paraffine. et on les a placés dans des tubes Eppendorf. Les sections ont été déparaffinées avec des lavages dans du xylene suivis de rinçages dans de l’éthanol. Les acides nucléiques ont été isolés avec un kit d’extraction commercial High Pure Viral Nucleic Acid Kit; Roche Diagnostics selon les instructions du fabricant Analyses moléculaires Les échantillons myocardiques ont été examinés pour l’adénovirus, le CMV, l’entérovirus, HHV-, les virus grippaux A et B, le parvovirus B et les génomes de rhinovirus en utilisant des tests PCR selon les protocoles standards du laboratoire de diagnostic viral. au département de virologie, Université de Turku Turku, Finlande Les méthodes utilisées ont été décrites ailleurs , excepté celles utilisées pour les virus grippaux A et B La PCR a été réalisée en utilisant le système RT-PCR Titan One Tube Roche Diagnostics Les séquences d’amorce étaient les suivantes: grippe AH, «-GATACTGAGCTCAATTGCTC-»; grippe A H -, ‘-ATGCAGACACAATATGTATAGGC-‘; grippe A H, «-GAGCTGGTTCAGAGTTCCTC-»; grippe A H -, ‘-GTGACCTAAGGGAGGCATAATC-‘; la grippe B, «-GTAAACACCCACATTCCAAACG-»; et influenza B -, ‘-GAAGTAGGTGGAGACGGAGGG-‘ L’amplification d’échantillons PCR-négatifs avec des amorces de β-actine humaine a été réalisée pour montrer la présence d’acides nucléiques cellulaires dans les échantillons , et seuls les échantillons avec un signal positif ont été inclus dans l’étude un échantillon de tissu peut avoir des résultats de PCR positifs en raison de virémie ou de cellules sanguines circulantes hébergeant le virus, une hybridation in situ a été réalisée pour les échantillons avec des résultats PCR positifs pour CMV, HHV- et parvovirus B Des hybridations in situ ont également été réalisées pour des échantillons PCR-négatifs Panasonic a été utilisé pour l’hybridation du CMV, une oligoprobe bionylée Qiagen a été utilisée pour l’hybridation HHV et un produit d’amplification marqué par la digoxigénine d’une PCR du parvovirus à partir d’un échantillon de sérum positif pour le parvovirus. a été utilisé pour l’hybridation du parvovirus B Les procédures d’hybridation CMV et HHV- étaient des modifications des protocoles précédemment décrits I Bref, après déparaffinage et hybridation, les lames des essais d’hybridation in situ du CMV ont été incubées avec un anticorps anti-digoxigénine conjugué à la phosphatase alcaline Roche Diagnostics Le test d’hybridation in situ HHV- a été réalisé en utilisant un anticorps anti-biotine de lapin Enzo, suivi par Utilisation d’un second vecteur de vecteur IgG anti-lapin biotinylé et d’un conjugué streptavidine-phosphatase alcaline Zymed Pour les hybridations in situ du CMV et du HHV-, chlorure de tétra-zolium bleu nitro, -bromo-chloro-indolyl-phosphate, sel de toluidine NBT -BCIP; Roche Diagnostics a été utilisé comme substrat, et l’hémalum a été utilisé comme contre-colorant. L’hybridation in situ de Parvovirus B a été réalisée à l’aide de l’automate d’hybridation in situ Ventana Discovery Ventana Medical Systems et du protocole « Research ISH BlueMap ». min et ont été hybridées pour h à ° C Après des lavages à ° C pendant min avec du tampon chlorure de sodium-citrate de sodium SSC, x SSC et x SSC, les lames ont été incubées avec l’anticorps anti-digoxigénine biotinylé Jackon ImmunoResearch, et le signal a été développé avec NBT-BCIP Les lames ont été contre-colorées avec le rouge nucléaire rapide Les signaux positifs des hybridations in situ ont été considérés comme une coloration nucléaire tachetée sombre. Analyses statistiques Les différences entre les groupes ont été analysées avec le test t de Student et le logiciel SPSS. Les différences SPSS ont été considérées comme statistiquement significatives à P & lt;

Résultats

Les symptômes cardiaques cliniques avaient été présents pendant une gamme médiane de jours, & lt; jours avant le décès Sur la base des dossiers cliniques,% des patients étaient décédés d’une insuffisance cardiaque progressive, alors que la mort était due à d’autres mécanismes principalement l’arrêt cardiaque chez% des patients Trois patients avaient été retrouvés morts Des signes et des symptômes d’une maladie infectieuse ont été rapportés chez des patients% Une maladie cardiaque ou systémique antérieure pouvant affecter le myocarde avait été présente chez des patients% Tableau Une condition ou un traitement immunodéprimant était présent ou reçu par les patients% table Aucun des sujets témoins toute preuve d’une affection immunodéprimante ou d’un traitement immunodéprimé

Tableau View largeDownload slideCaractéristiques des patients atteints de myocardite mortelle et résultats de tests d’hybridation in situ et de PCRTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients atteints de myocardite mortelle et résultats de tests d’hybridation in situ et par PCRLes génomes viraux ont été trouvés par PCR dans les échantillons cardiaques de% des patients mort de la table myocardite La présence la plus fréquente de CMV CMV ADN a été détectée dans les échantillons myocardiques des patients% L’ADN de Parvovirus B a été amplifié dans les échantillons des patients%, dont les échantillons ont également donné des résultats positifs du test PCR CMV. % patient, CMV a été détecté simultanément avec enterovirus Herpèsvirus humain a été détecté chez le patient Aucun adénovirus, virus de la grippe A ou B, ou des génomes de rhinovirus ont été trouvés dans les échantillons cardiaques des patients atteints de myocardite mortelle. autres patients atteints de myocardite fatale âge moyen ± SEM, ± vs ± années; P = En revanche, aucune différence de sexe ou de caractéristiques cliniques n’a été observée entre les patients avec PCR virale positive, en particulier les résultats de PCR CMV et les patients avec PCR négative. Les échantillons pour patients immunodéprimés ont donné des résultats PCR positifs. Seulement cas% L’ADN de Parvovirus B a été trouvé dans des échantillons d’une femme âgée, et l’ADN HHV a été trouvé dans des échantillons d’une femme âgée. Aucun signe d’adénovirus, CMV, entérovirus, virus grippal A ou B, ou rhinovirus Un signal positif dans l’hybridation in situ du CMV a été observé en% du tableau des échantillons positifs pour la PCR du CMV Seules les cellules interstitielles ont donné des résultats positifs par hybridation in situ dans les échantillons Chez les autres patients, l’hybridation in situ a révélé localisation de l’ADN du CMV non seulement dans les cellules interstitielles, mais aussi dans les cardiomyocytes figure A L’ADN de Parvovirus B a été trouvé à la fois dans les cardiomyocytes figure B et inter cellules stitales de tous les patients PCR-positifs HHV-ADN a été détecté uniquement dans le tableau des cellules interstitielles Les échantillons provenant de sujets témoins négatifs à la PCR ont eu des résultats négatifs de l’hybridation in situ

Figure Vue largeDownload slideRésultats des tests d’hybridation in situ pour le cytomégalovirus A et le parvovirus BB L’acide nucléique viral est visible sous forme de couleur foncée dans les cardiomyocytesFigure View largeDownload slideRésultats des tests d’hybridation in situ pour le cytomégalovirus A et le parvovirus BB L’acide nucléique viral est visible comme une couleur foncée dans les cardiomyocytes

Discussion

Ces maladies peuvent avoir des implications cliniques importantes pour le traitement de la myocardite sévère. Dans les pays développés, l’infection primaire par le CMV survient tôt dans la vie, la séroprévalence chez l’adulte étant de ~% . Après l’infection primaire, le virus persiste dans le corps et se trouve principalement dans les leucocytes et les cellules endothéliales Chez les sujets immunocompétents, les infections primaires, les réactivations et les réinfections sont généralement asymptomatiques, mais il existe aussi de rares cas de En revanche, les patients immunodéprimés et surtout les receveurs de greffes d’organes sont sujets à une mortalité et à une morbidité importantes dues à l’infection par le CMV CMV a un tropisme tissulaire large et est capable de Pour infecter plusieurs organes, y compris le cœur Récemment, une association entre le CMV et la myocardite adolescents et adultes a été proposé PCR des échantillons cardiaques principalement des échantillons de biopsie de & gt; Des études antérieures utilisant l’hybridation in situ ont détecté le génome du CMV dans les cardiomyocytes dans% -% des échantillons de biopsie endomyocardique obtenus chez des patients atteints de myocardite active [,,] Ces études ont cependant Nous avons trouvé que le génome du CMV était présent chez% des patients avec une myocardite fatale Les résultats des tests d’hybridation in situ pour le CMV étaient positifs dans% de ces échantillons positifs pour le CMV PCR et ont révélé la localisation. D’autre part, notre matériel d’étude ne comprenait que des données provenant des cas les plus graves de myocardite chez des patients non immunodéprimés. Ainsi, nos résultats fournissent des preuves inédites de l’ADN viral des cardiomyocytes dans la majorité des échantillons. de l’importance du CMV comme cause de myocardite mortelle grave chez des sujets immunocompétents Les traitements antiviraux sont connus pour être efficaces dans le traitement de la maladie à CMV chez les patients immunodéprimés Il a été démontré que le traitement par le ganciclovir ou le cidofovir réduit la sévérité du CMV murin aigu. myocardite On a également montré que l’IFN-β antiviral avait des effets bénéfiques sur la myocardite aiguë à Coxsackievirus murin et chez les patients atteints de cardiomyopathie à infection persistante à entérovirus ou à adénovirus Récemment, de grandes études ont suggéré que Les infections respiratoires, à savoir les entérovirus et les adénovirus, sont les principales causes de myocardite clinique Nous avons été incapables de confirmer ces résultats dans une étude en population de cas mortels. Cela implique que les causes de myocardite mortelle peuvent différer de la causes des formes de maladies bénignes plus courantes Nos résultats sont en ligne avec la constatation précédente <% des cas de myocardite étaient associés à la grippe L'infection par le parvovirus B a déjà été associée à une myocardite mortelle chez l'enfant [et] et l'adulte , ainsi qu'au syndrome de mort subite du nourrisson . Nous avons trouvé le génome du parvovirus B en% des échantillons cardiaques provenant de patients atteints de myocardite mortelle. La majorité de ces patients présentaient également un CMV ici. ADN dans les tissus cardiaques, ce qui peut avoir contribué au mauvais pronostic. Nous avons utilisé une étude rétrospective car elle a rendu possible un dépistage étiologique efficace. Une possible limitation de cette approche est la dégradation possible des acides nucléiques dans les échantillons cardiaques. [,,] On sait que la dégradation de l’ARN se produit plus facilement que celle de l’ADN Dans la présente étude, les données provenant uniquement des cas qui satisfont d Les critères de Dallas en réanalyse histopathologique ont été exclus en raison de la dégradation des acides nucléiques Bien que des acides nucléiques cellulaires d’un gène domestique aient été trouvés, il est encore possible que nous soyons incapables de détecter l’ARN viral suite à une dégradation marquée des génomes viraux. des données provenant d’un nombre limité de sujets témoins appariés selon l’âge et le sexe, affectant possiblement les estimations de la positivité virale dans une population saine. Une autre limitation de la nature rétrospective de notre étude est la disponibilité des données cliniques. En conclusion, l’infection du cœur par le CMV est fréquente en cas de myocardite mortelle Cette observation appelle à des investigations sur l’efficacité potentielle du traitement antiviral contre l’infection par le CMV chez les patients atteints de myocardite aiguë sévère.

Remerciements

Nous souhaitons remercier le Dr Günther Schwesinger et le Dr Véronique Henn pour leur aide dans les études histopathologiques. Marita Maaronen, Toini Tolvanen et Raisa Loginov sont reconnues pour leur assistance en laboratoire. Les hôpitaux et les départements de médecine légale participant à la collecte du matériel d’étude sont remerciés. L’École supérieure des sciences biomédicales de Turku, la Fondation Ida Montin, la Fondation médicale finlandaise, la Fondation Aarne et Aili Turunen, la Fondation finlandaise de recherche cardiovasculaire et la Fondation EVO de l’Hôpital central universitaire d’Helsinki. Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: aucun conflit